肠杆菌植酸酶基因的克隆及重组表达

摘要：

植酸酶水解植酸产生可溶性磷酸,广泛应用于饲料、有机及生物肥料;植酸酶性质和植酸酶发酵制备是植酸酶制剂生产的基础.利用实验室前期筛选的降解有机磷Enterobacter asburiae ZSH Y1菌株,克隆其植酸酶基因phyE,构建质粒pET28a(+)表达载体,在Escherichia coli BL21(DE3)中进行异源表达;利用Ni-NTA和Q-Sepharose Fast Flow对重组酶PhyZSHY1-nsp进行纯化,表征其酶学性质及反应动力学参数.结果表明:植酸酶基因phyE全长1359bp,编码452个氨基酸,前20个氨基酸为信号肽.重组酶的酶促反应最适温度和pH值分别为60℃和4.5,在酸性条件下,可以保持60％以上酶活,是中温酸性植酸酶.Mg2+、Cu2+、Zn2+、Al3+等金属离子及SDS对酶促反应有抑制作用,并随着浓度的增加抑制作用增强;植酸钠为底物时,Km为0.859mmol·L-1,kcat为16.036s-1,kcat/Km为18.66L·s-1·mmol-1,说明重组植酸酶PhyZSHY1-nsp具有较好的温度和酸碱稳定性,可被制成酶制剂应用于动物饲料和生物肥料中.

关键词：植酸酶、肠杆菌、重组表达、分离纯化、酶学性质

所属期刊栏目：53

分类号：Q786;Q814(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金52000020

在线出版日期：2022-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：394-404