番茄花柄脱落过程的酵母双杂交cDNA文库构建

摘要：

为进一步阐明脱落的分子机理,采用SMART(switching mechanism at 5' end of the RNA transcript)技术,在酵母菌株Y187中构建番茄花柄脱落过程的酵母双杂交cDNA文库.以中蔬6号番茄花柄为试材,选取其不同脱落阶段的离区,提取总RNA,利用SMART技术合成双链cDNA,产物经CHROMA SPINTM+TE-400柱纯化后,与载体pGADT7-Rec共转化入酵母菌Y187感受态中,在缺少亮氨酸的培养基(SD-Leu with agar)上培养收集所有克隆.经鉴定,cDNA文库的转化效率为5.6×106cfu?μg-1,文库容量为2.4×107cfu,文库滴度为4.9×108cfu?mL-1,平均插入片段长度大于1000bp,重组率为100%.随机挑取20个单克隆测序,比对NCBI数据库分析获得了19个已知蛋白序列和1个未知蛋白序列.已知功能的序列编码的蛋白分为4类,包括酶类蛋白、转录因子、载体蛋白和逆境响应蛋白,参与蛋白质磷酸化、水分运输和氧化还原反应等生物过程,其中7个序列之前被报道参与脱落.结果表明获得该文库质量较高,为筛选番茄花柄脱落过程中的互作蛋白奠定了基础.

关键词：番茄、SMART技术、酵母双杂交、cDNA文库、脱落、花柄离区

所属期刊栏目：49

分类号：S625.2(设施园艺（保护地栽培）)

资助基金：国家自然科学基金项目31672197,31572167;国家重点研发计划支持项目2016YFD0201004;国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目CARS-25

在线出版日期：2018-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：129-135