慢病毒包装体系的建立与体外表达

摘要：

为筛选出最佳的慢病毒转染处理时间,研究三质粒对慢病毒包装的最佳浓度配比,以及对293T细胞的细胞转染率和滴度,通过脂质体与Fugw质粒混合后转染293T细胞,观察293T细胞的形态和荧光表达量。结果表明：转染6h组的细胞形态略好于8h；转染8h组和6h组的转染率均极显著高于10h组(p﹤0.01),但彼此间差异不显著(p>0.05)；质粒配比为4：3：2时,慢病毒滴度最高,达3.795×107 TU?mL-1,经离心后滴度与离心之前相比能提高100倍。不同浓度的质粒配比对293T细胞转染率和滴度方面,B组(4：3：2)的转染率最高、C组(3：2：1)最低、A组(5：4：3)介于二者之间,3组间彼此差异极显著(p﹤0.01)；转染后B组的滴度极显著高于A组和C组(p﹤0.01),而A组和C组间差异不显著(p>0.05)。感染293T靶细胞存在EGFP基因表达。利用10μL脂质体2000介导4μg的Fugw质粒转染293T细胞的最佳时间为6h；当Fugw：?8.2：Vsvg为4：3：2时,慢病毒转染293T细胞的效果最好。

关键词：慢病毒、转染、293T细胞、滴度

所属期刊栏目：47

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：农业部转基因生物新品种培育重大专项基金项目H022020060420

在线出版日期：2016-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：432-437