粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶提取方法研究

摘要：

为建立一种高效的粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶粗酶提取方法,对比了酶法、研磨法、超声波法和玻璃珠法对粘红酵母胞内粗酶提取的影响,通过可溶性蛋白浓度分析和ATP-柠檬酸裂解酶活性测定,对粗酶提取方法进行评价,并在此基础上从震荡时间和珠体装量方面对玻璃珠法粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶提取工艺进行了优化.可溶性蛋白浓度分析和ATP-柠檬酸裂解酶活性测定结果表明:玻璃珠法提取粗酶优于其他3种方法.对玻璃珠法进行进一步优化,得到的最优化的提取条件为细胞干重与珠体重量之比为1∶1,冰浴震荡时间为20min,在此条件下,ATP-柠檬酸裂解酶比活可达到0.98U· mg-1,分别是酶法、研磨法、超声波法测得酶活性的1.9,2.2,2.1倍,可溶性蛋白浓度为6.5mg· mL-1,分别是酶法、研磨法、超声波法测得酶活性的1.4,4.1,3.3倍.经过优化的玻璃珠法提取粘红酵母胞内粗酶液操作简便,且能够保持较高的ATP-柠檬酸裂解酶活性,是较理想的粘红酵母粗酶提取方法.

关键词：粘红酵母、粗酶提取、ATP-柠檬酸裂解酶、比活力

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分类号：Q939.97(微生物学)

资助基金：清华大学自主科研计划项目2012202144;工业生物催化教育部重点实验室清华大学开放基金项目2015302

在线出版日期：2016-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：103-108