米蛾β-actin基因cDNA片段的克隆及表达量检测

摘要：

为克隆米蛾[Corcyra cephalonica(Stainton)]β-actin基因cDNA片段,建立米蛾[β-actin基因实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,并评估其在实时荧光定量研究中作为内参基因的可靠性,利用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆获得米蛾β-actin基因cDNA片段,采用SYBR Green Ⅰ染料法建立qRT-PCR方法,检测在米蛾卵、幼虫、蛹和成虫4个虫态中β-actin基因的表达量.获得了长为822bp的米蛾β-actin基因片段(GenBank accession:KJ599569),编码273个氨基酸残基;荧光定量标准曲线的Ct值检测范围为13～28,扩增效率为90.1％,相关系数R2=0.992,溶解曲线分析结果显示产物为特异的单峰,其Tm值为(84±0.5)℃,符合定量要求;实时荧光定量结果表明,β-actin基因在米蛾不同发育历期中的表达水平无显著性差异(p＞0.05).成功建立了米蛾β-actin基因qRT-PCR方法,β-actin基因可以作为米蛾基因表达定量研究中的可靠内参基因.研究结果为β-actin作内参基因进行米蛾功能基因表达差异研究奠定了分子基础.

关键词：米蛾、β-actin基因、反转录PCR、实时荧光定量PCR

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分类号：S433.4(病虫害及其防治)

资助基金：国家自然科学基金项目30971962;教育部博士点基金项目20112103110008;辽宁省教育厅项目L2013267

在线出版日期：2016-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：24-28