单头赤眼蜂DNA提取方法比较及其PCR反应体系优化

摘要：

为了探明有效的基因组DNA提取方法和PCR反应体系,从而得到符合分子生物学实验要求的基因组DNA模板的数量和质量,以单头松毛虫赤眼蜂为材料,应用CTAB法、SDS法和Chelex法进行基因组DNA提取效果的比较,并将核酸助沉剂用于赤眼蜂DNA的提取中,然后将提取的基因组DNA采用L16(45)正交设计试验,对影响赤眼蜂基因组DNA PCR反应体系的5因素(Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、DNA模板、Ta聚合酶)4水平进行筛选.结果表明:CTAB法优于SDS法和Chelex法,且核酸助沉剂的加入明显增强了模板DNA提取效果.同时确立的ITS2的PCR优化反应体系为:总体积为25mL,Mg2+浓度为1.50mM,dNTPs浓度为0.25mM,引物浓度为0.30μM,DNA模板取2.00μL,Taq聚合酶量为2.00U.

关键词：赤眼蜂、DNA提取、核酸助沉剂、正交设计、PCR体系优化

所属期刊栏目：42

分类号：S476.3(各种防治方法)

资助基金：国家自然科学基金项目30871674,30971962;国家“十一五”科技支撑计划项目2006BAD0806-01;辽宁省高校重点实验室支持计划项目2008S203;辽宁省教育厅科研项目L2010488;沈阳农业大学教师科研基金项目20091012

在线出版日期：2011-12-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：170-174