人源弹性蛋白酶基因原核载体构建及表达

摘要：

从人体肾脏组织中提取的总RNA中通过反转录PCR(RT-PCR)扩增得到了ELA2B基因,并将其克隆到pGEM-T easy载体中.然后用限制性内切酶BamH Ⅰ和Hind Ⅲ对重组质粒pGEM-T easy/ELA2B和大肠杆菌E.coli表达质粒pET30a进行双酶切,成功构建了原核表达载体pET30a/ELA2B.将重组质粒转化大肠杆菌表达宿主BL21中,通过PCR和表型鉴定表明,ELA2B基因已经整合到大肠杆菌BL21染色体上.用IPTG对重组的大肠杆菌BL21进行诱导表达,得到的蛋白经SDS-PAGE分析结果表明:菌体中含有一明显特异性蛋白,大小为28 kD.经包涵体复性后在弹性蛋白酶活性检测平板上发现有代表弹性蛋白酶作用的透明圈产生,可初步证实表达产物具有生物活性.

关键词：人源弹性蛋白酶、大肠杆菌、基因克隆、蛋白表达

所属期刊栏目：41

分类号：R394.2

资助基金：国家高技术研究发展计划863项目2006AA10Z440;国家自然基金资助项目30800770;国家转基因生物重大专项资助项目2008ZX08012-001

在线出版日期：2011-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：580-584