基于CRISPR/Cas9方法构建'沪农灵芝1号'基因编辑系统

摘要：

构建密码子优化的cas9表达质粒pMD-EXP-cas9,通过聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)介导转化灵芝(Ganoderma lucidum)菌株'沪农灵芝1号'('Hunong No.1')单核菌株L1,得到含有cas9完整表达盒的菌株L1-cas9.利用T7启动子构建靶向ura3基因的表达质粒psgRNA-1和psgRNA-2,体外转录后得到sgRNA 1和sgRNA2.通过PEG介导的转化,将sgRNA 1和sgRNA2转化进L1-cas9的原生质体中,得到ura3基因被破坏的突变体,首次在'沪农灵芝1号'菌株单核体中构建成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白 9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)基因编辑系统,ura3基因的编辑效率为4个突变体(107个原生质体).利用0.006％曲拉通X-100优化PEG介导的转化系统,可使ura3基因编辑效率提高至18个以上突变体(107个原生质体),本研究的结果为灵芝基因功能的研究和分子育种提供更高效的方法.

关键词：’沪农灵芝1号’、基因破坏、成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)、曲拉通X-100

所属期刊栏目：30

分类号：Q933;R954;J523

资助基金：上海市现代农业产业技术体系;上海市农业科学院卓越团队建设计划

在线出版日期：2023-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：9-18