10.3969/j.issn.1005-9873.2012.02.001
银耳芽孢内源gpd启动子的克隆与功能鉴定
利用反向长距离PCR技术从银耳(Tremella fuciformis)芽孢gpd基因出发克隆上游gpd启动子序列,将预测的gpd启动子片段与多功能纤维素基因(mfc)连接构建表达载体,与潮霉素抗性质粒pBgGl-hph共转化银耳芽孢,对拟共转化子进行酶活发酵试验.结果表明:4轮反向长距离PCR克隆得到了1761 bp的上游序列,经预测启动子落在上游1000 bp左右区域内,包含两个高分值的起始转录位点,将gpd启动子分成gpd-Tre1(885 bp)、gpd-Tre2(708 bp)、gpd-Tre3(466 bp)3段区域,分别与多功能纤维素基因(mfc)构建表达载体pgTrc1-mfc、pgTre2- mfc和pgTre3- mfc.拟共转化子酶活发酵试验结果发现3个表达载体的转化子均能检测到多功能纤维素酶活,转化子T1-2包含gpd-Tre1启动子大片段,整体酶活最高,CMC酶活为14.12 U/mL,比出发菌株Tr01提高34.3%,比工程菌株yLes3提高25.7%,木聚糖酶活为34.8 U/mL,比Tr01酶活提高26.3%,略低于yLes3.3个启动子片段均具有表达活性,相比之下885 bp的大片段gpd启动子表达活性更高.
银耳、芽孢、gpd启动子、反向长距离PCR、多功能纤维素酶
TS2;R73
国家高技术研究发展计划2006AA10Z301;国家自然科学基金30371000,30671457的部分研究内容
2012-10-31(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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