银耳芽孢内源gpd启动子的克隆与功能鉴定

摘要：

利用反向长距离PCR技术从银耳(Tremella fuciformis)芽孢gpd基因出发克隆上游gpd启动子序列,将预测的gpd启动子片段与多功能纤维素基因(mfc)连接构建表达载体,与潮霉素抗性质粒pBgGl-hph共转化银耳芽孢,对拟共转化子进行酶活发酵试验.结果表明:4轮反向长距离PCR克隆得到了1761 bp的上游序列,经预测启动子落在上游1000 bp左右区域内,包含两个高分值的起始转录位点,将gpd启动子分成gpd-Tre1(885 bp)、gpd-Tre2(708 bp)、gpd-Tre3(466 bp)3段区域,分别与多功能纤维素基因(mfc)构建表达载体pgTrc1-mfc、pgTre2- mfc和pgTre3- mfc.拟共转化子酶活发酵试验结果发现3个表达载体的转化子均能检测到多功能纤维素酶活,转化子T1-2包含gpd-Tre1启动子大片段,整体酶活最高,CMC酶活为14.12 U/mL,比出发菌株Tr01提高34.3％,比工程菌株yLes3提高25.7％,木聚糖酶活为34.8 U/mL,比Tr01酶活提高26.3％,略低于yLes3.3个启动子片段均具有表达活性,相比之下885 bp的大片段gpd启动子表达活性更高.

关键词：银耳、芽孢、gpd启动子、反向长距离PCR、多功能纤维素酶

分类号：TS2;R73

资助基金：国家高技术研究发展计划2006AA10Z301;国家自然科学基金30371000,30671457的部分研究内容

在线出版日期：2012-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

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