穿膜肽标记的荧光素酶蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化及其活性研究

摘要：

将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在不同的诱导时机、诱导温度、IPTG的浓度和Mg2+浓度条件下培养大肠杆菌,通过SDS-PAGE和发光强度检测分析TAT-LUC的酶活性强度及表达量;将高活性的TAT-LUC与LUC对比检测ATP,通过发光强度分析 TAT-LUC的敏感性和可靠性.表明:在含Mg2+浓度为50 mmol/L的LB培养基中将大肠杆菌培养至 OD600为0.6时,加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG,22 ℃诱导16 h可获得大量高活性的 TAT-LUC;相比LUC,TAT-LUC可以检测到小于10 nmol/L的ATP,发光强度与ATP含量呈强相关性(R2= 0.99);并且不用裂解细胞,TAT-LUC可直接检测至少40个细胞内ATP;穿膜肽标记的荧光素酶蛋白成功用于检测活细胞内的 ATP含量.

关键词：荧光素酶、穿膜肽、ATP、表达条件、酶活性

所属期刊栏目：35

分类号：TP212.3(自动化技术及设备)

资助基金：国家自然科学基金项目81602608

在线出版日期：2018-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：62-66