MiR-27b-3p靶向ID-3调控骨肉瘤细胞增殖的研究
目的 观察微小RNA-27b-3p(microRNA-27 b-3p,miR-27b-3p)与DNA结合/分化抑制蛋白-3(DNA bind-ing/differentiation inhibitory protein-3,ID-3)的靶向关系,分析其对增殖的调控作用.方法 应用前瞻性研究方法,选择人骨肉瘤细胞株U2OS,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-27b-3p与ID-3的靶向关系.建立空白对照组(NC组)、空载体转染组、miR-27b-3p mimic组、miR-27b-3p mimic和siRNA ID-3共转染组,每组纳入12个培养皿.采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞的活性,采用集落形成实验观察细胞的克隆形成情况.应用Western Blot法检测ID-3和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达.选择骨肉瘤术后组织共40例,其中男22例,女18例;年龄4～88岁,平均年龄(16.3±4.3)岁.应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-27b-3p的表达,应用免疫组化法检测ID-3和PCNA的表达.结果 双荧光素酶报告基因实验发现miR-27b-3p能引起转染pGL3-ID-3-WT的细胞中荧光素酶活性降低.与空白对照组和空载体转染组比较,miR-27b-3p mimic组细胞活性明显下降,克隆集落数量明显减少,PCNA的表达下降,miR-27b-3pmimic和siRNA ID-3共转染组能逆转上述表达水平.骨肉瘤组织中miR-27b-3p与ID-3、miR-27b-3p与PCNA均具有负相关性,ID-3与PCNA具有正相关性.miR-27b-3p的表达与生存时间相关.结论 miR-27b-3p靶向ID3负调控骨肉瘤细胞的增殖,MiR-27b-3p低表达可能与不良预后有关.
骨肉瘤、微小RNA-27b-3p、DNA结合/分化抑制蛋白-3、细胞增殖
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R738.1(肿瘤学)
河北省重点研发计划指导项目172302076
2021-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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