人PKM2基因克隆、表达及纯化的研究

摘要：

目的:构建人PKM2(M2-type pyruvate kinase)的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达,镍离子柱亲和层析法纯化融合蛋白.方法:用PCR方法从宫颈癌Hela细胞全基因组中扩增出目的基因PKM2,通过克隆载体pET30a(+)构建质粒载体pET30a(+)-PKM2.经双酶切和DNA测序证实正确后,用Ni-NTA亲和层析柱进行纯化.结果:双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果和报道一致.经SDS-PAGE分析,纯化后的蛋白约在58 KDa位,条带单一,无杂带出现.结论:成功表达纯化了PKM2融合蛋白,为肿瘤疫苗研制和肿瘤标志物快速诊断的研究奠定基础.

关键词：PKM2、克隆、表达、纯化

所属期刊栏目：29

分类号：R737.33(肿瘤学)

资助基金：甘肃省应用技术研究与开发项目1105TCYA016

在线出版日期：2013-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：270-273