硝苯地平诱发儿童肝损伤的分子机制

摘要：

目的 建立硝苯地平肝损伤的细胞分子模型,研究硝苯地平诱导儿童肝细胞损伤的分子机制.方法 采用肝癌细胞系HepG2建立硝苯地平肝细胞损伤细胞模型,确定硝苯地平处理细胞的最佳浓度及时间.应用Western blot及实时定量PCR(RT-PCR)方法检测细胞特异性肝功能蛋白水平[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)和碱性磷酸酶(ALP)]及其mRNA变化,利用流式细胞学技术及细胞克隆形成实验确定硝苯地平对细胞周期及其生长增殖的影响.结果 1.硝苯地平体外致肝细胞损伤的最佳浓度为20 mg/L,最佳时间为21 d.2.Western blot结果:硝苯地平组细胞内ALT水平低于对照组,而硝苯地平处理组培养基内ALT、AST、γ-GT及ALP蛋白水平(3.55 ± 0.05、4.91 ± 0.06、3.51 ± 0.05、3.08 ± 0.08)均高于对照组(0.96 ± 0.02、1.03 ± 0.02、1.00 ± 0.05、0.90 ± 0.13),差异均有统计学意义(t= -85.695、-117.582、-47.371、-33.260,均P<0.05).3.RT-PCR结果:硝苯地平组细胞内ALT、γ-GT及ALP mRNA水平(0.26 ± 0.02、0.05 ± 0.04、0.05 ± 0.02)均低于对照组(1.13 ± 0.21、0.94 ± 0.10、1.03 ± 0.06),差异均有统计学意义(t=7.233、127.436、25.687,均P<0.05);而硝苯地平组培养基内mRNA水平(5.95 ± 0.05、3.13 ± 0.10、3.32 ± 0.08)均高于对照组(1.01 ± 0.08、1.00 ± 0.05、1.00 ± 0.05),差异均有统计学意义(t= -92.339、-31.250、-43.007,均P<0.05).4.细胞流式检测结果:硝苯地平组G0/G1期细胞比例[(84.09 ± 0.43)%]高于对照组[(30.93 ± 0.32)%],差异有统计学意义(t=173.084,P=0.000).5.硝苯地平组细胞克隆形成率和细胞增殖速率[(38.56 ± 1.51)%、(25.00 ± 1.71)%]均低于对照组[(97. 10 ± 1. 17)%、(56. 37 ± 2.06)%],差异均有统计学意义(t=92.088、20.285,均P=0.000).结论 硝苯地平可能通过调节细胞周期相关蛋白促进肝细胞损伤.

关键词：硝苯地平、HepG2、肝功能、细胞增殖

所属期刊栏目：33

分类号：R735.7;R575;R979.1

在线出版日期：2019-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：465-469