地塞米松通过稳定磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B分子信号通路对嘌呤霉素诱导足细胞凋亡的抑制作用

摘要：

目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)分子信号通路在地塞米松(DEX)抑制嘌呤霉素(PAN)引起足细胞凋亡中的作用.方法 体外培养小鼠肾小球足细胞系,并设立对照组、溶媒溶剂二甲基亚砜(DMSO)组、PAN组、DEX组及PI3K特异性抑制剂LY294002组.采用实时荧光定量PCR、间接免疫荧光染色检测CD2相关蛋白(CD2AP) mRNA表达水平及细胞内分布情况,激光共聚焦检测其与p85的共定位分布的情况;Western blot检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)和磷酸化GSK3β(p-GSK3β)的表达.结果 PAN组各时间点(8h、24 h、48 h)CD2AP mRNA (1.11±0.16、0.78±0.09、0.56±0.43)显著低于对照组(1.90±0.26、2.09±0.12、2.28 ±0.95),差异均有统计学意义(均P＜0.05),CD2AP蛋白呈均匀细丝状分布于胞质足突并在细胞核内转变为不连续粗颗粒状集中分布于核周,CD2AP与p85在细胞核膜、细胞质及细胞膜均匀的重叠转变为核内增多的强荧光信号的重叠;DEX组各时间点(8h、24h、48 h)CD2AP mRNA(1.53±0.14、2.15 ±0.27、2.13±0.15)显著高于PAN组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),CD2AP蛋白在细胞膜、胞质的分布密度、分布范围大于PAN组,与p85其重叠荧光信号向核内积聚明显减轻;PAN刺激足细胞15 min后p-Akt蛋白表达水平最低,p-GSK3β蛋白表达水平在30 min最低,p-Akt及p-GSK3β蛋白表达水平呈PAN浓度依赖性下降(P＜0.05),不同浓度DEX干预后p-Akt及p-GSK3β蛋白表达水平均呈DEX浓度依赖性地恢复(P＜0.05),LY294002组p-Akt及p-GSK3β的表达则显著下降(P＜0.01).结论 DEX通过稳定CD2AP的表达水平和分布情况来保护足细胞,抑制足细胞凋亡;PI3 K/Akt分子信号通路稳定的表达水平是DEX保护足细胞的关键因素.

关键词：足细胞、CD2相关蛋白、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B、地塞米松

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资助基金：国家自然科学基金81670652,81273205;广东省科技计划项目2016A020215010National Natural Science Foundation of China81670652,81273205;Science and Technology Planning Project of Guangdong Province2016A020215010

在线出版日期：2019-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：677-681