胎鼠末端后肠发育后期微小 RNA 差异表达

摘要：

目的：检测乙烯硫脲致畸胎鼠末端后肠发育后期微小 RNA（miRNAs）的表达情况。方法将24只雌鼠应用数字表法随机分为2组，按雌雄比例21配对合笼。实验组大鼠（12只）于孕11 d 经胃管注入10 g／L 乙烯硫脲（125 mg／kg），对照组（12只）注入等量蒸馏水，继续保持妊娠。于孕16 d 剖宫取出胎鼠，每只孕鼠各取2只体质量相似胎鼠，每组24只，取末端后肠1 cm，采用 Trizol 法提取总 RNA。应用试剂盒将提取RNA 加上 Poly（A）尾和生物素标志后进行芯片杂交，杂交完成后洗染、扫描获取图片与数据。根据 miRNAs 差异表达谱及靶基因分析结果，选取可能调控胎鼠末端后肠发育关键基因的 miRNAs 进行靶基因表达验证。结果孕16 d，实验组胎鼠与对照组相比，111个 miRNAs 表达上调，117个 miRNAs 表达下调。筛选出差异表达倍数最大的10个 miRNAs 进行靶基因预测及 Pathway 和 Gene Ontology 分析，结果发现部分基因与胎鼠末端后肠发育密切相关，如 Shh、Hoxd13等。致畸胎鼠末端后肠 miRNAs 差异表达及靶基因分析结果显示，miR-193可能存在调控末端后肠发育关键基因 Hoxd13的作用。Real-Time PCR 及 Western blot 检测显示，在大鼠肠上皮细胞中转染 miR-193后，Hoxd13基因及蛋白表达水平明显下降，与对照组比较（1．00±0．12比0．71±0．10）（0．88±0．06比0．75±0．08）差异有统计学意义（t ＝3．329、3．130，P ＝0．029、0．011）。结论miRNAs 可能在胎鼠末端后肠发育过程中起重要的靶基因表达调控作用，miR-193能够显著抑制大鼠肠上皮细胞 Hoxd13基因的表达。

关键词：微小 RNA、后肠、基因表达、发育、大鼠

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资助基金：高等学校博士学科点专项科研基金20130181120042；四川省应用基础研究项目2013JY0174Fund programResearch Fund for the Doctoral Program of Higher Education of China 20130181120042；Basic Research Project of Sichuan Province 2013JY0174

在线出版日期：2019-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1826-1828