微 RNA-939靶向启动子区调控 CD2相关蛋白的表达

摘要：

目的：验证微 RNA-939（microRNA-939，miR-939）与 CD2相关蛋白（CD2AP）的靶向调控关系。方法用 RegRNA 软件预测人 CD2AP 启动子区潜在的 miR-939结合位点。将人 CD2AP 启动子荧光素酶报告基因重组质粒 pGL3-2K 与 microRNA 阴性对照物（miR-NC）或 miR-939模拟物瞬时共转染 HEK-293T 细胞，24 h 后测定相对荧光素酶活性。用 miR-NC 或 miR-939模拟物转染 HEK-293T 细胞48 h，反转录-实时荧光定量 PCR 检测CD2AP mRNA 表达水平，Western blot 检测 CD2AP 蛋白表达水平。结果1．CD2AP 启动子区存在2个 miR-939结合位点，分别位于起始密码子 ATG（定位＋1）上游－468～－491和－654～－677。2．在30 nmol／L、50 nmol／L 水平，miR-NC 组和 miR-939组的相对荧光素酶活性分别为6．81±0．88比6．07±2．24、5．88±1．44比3．94±0．79，2组间差异均无统计学意义（t ＝3．04、2．06，P 均＞0．05）；达100 nmol／L 水平时，荧光素酶活性分别为5．58±0．58比3．29±0．64，差异有统计学意义（t ＝4．07，P ＜0．05）。3．在30 nmol／L、50 nmol／L、100 nmol／L 水平， miR-NC 组和 miR-939组的 CD2AP mRNA 相对表达量分别为1．00±0．01比0．80±0．08、1．00±0．00比0．80±0．13、1．00±0．00比0．72±0．07，CD2AP mRNA 水平在各浓度均下调20％～30％，组间差异有统计学意义（t ＝4．44、2．93、6．84，P 均＜0．05）。4．在50 nmol／L 水平，miR-NC 组和 miR-939组的 CD2AP 蛋白相对表达量为0．48±0．09比0．19±0．12，CD2AP 蛋白表达水平下调，差异有统计学意义（t ＝3．36，P ＜0．05）。结论CD2AP 是 miR-939的靶基因，miR-939通过靶向启动子区下调 CD2AP 的转录和表达，提示 miR-939可能介导足突细胞的损伤。

关键词：微 RNA-939、CD2 相关蛋白、足突细胞、启动子、基因表达调控

分类号：R735.2;R34;X592

在线出版日期：2019-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：132-135