microRNA-30c 沉默对 P19细胞增殖及分化的影响

摘要：

目的：通过沉默 microRNA（miRNA）-30c 研究 miRNA-30c 对 P19细胞增殖及分化功能的影响。方法将成功构建的 miRNA-30c 沉默质粒（miRNA-30c 沉默组）与空载质粒（阴性对照组）通过 lipo2000法分别转染 P19细胞，荧光表达观察质粒转染效率；通过杀稻瘟菌素 Blasticidin 筛选出 miRNA-30c 沉默稳定表达的P19细胞株；使用双荧光素酶报告基因间接验证成功沉默稳定表达的 P19细胞株；细胞增殖（CCK-8）法检测细胞增殖活性；使用二甲基亚砜（DMSO）诱导 P19细胞分化；倒置显微镜观察细胞分化形态变化；使用聚合酶链反应检测心肌分化标志基因（cTnT、NKX2.5、GATA4）的核酸表达水平。结果通过荧光表达观察到质粒成功转染入 P19细胞；双荧光素酶报告基因提示 miRNA-30c 沉默显著解除了 miRNA-30c 对靶基因 Gli2的抑制作用，细胞株成功建立（P ﹤0.001）；P19细胞分化过程中，倒置显微镜观察到 miRNA-30c 沉默组跳动心肌细胞的数量及频率均低于阴性对照组；检测心肌标志物发现 miRNA-30c 沉默组心肌细胞分化数量、标志基因表达均显著低于阴性对照组（P 均﹤0.05）。结论 miRNA-30c 沉默可以显著抑制 P19细胞增殖功能，并抑制其向心肌细胞的分化，为其用于心脏发育的进一步研究奠定基础。

关键词：microRNA-30c、P19 细胞、细胞增殖、分化

分类号：R542.2;R363;R730.2

资助基金：国家自然科学基金;江苏省医学重点人才项目

在线出版日期：2019-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：992-995