microRNA-709负性调控线粒体功能参与肾小管上皮细胞损伤

摘要：

目的 探讨microRNA-709(miR-709)在顺铂引起肾小管上皮细胞损伤模型中的作用及机制.方法 体外培养小鼠肾小管上皮细胞,予不同浓度(0、1、5、10、20 μmol/L)顺铂刺激24 h,以10 μmol/L顺铂刺激不同时间(0、2、6、12、24 h).采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测细胞miR-709的表达变化.实验组分为上调对照组、miR-709过表达组、下调对照组、miR-709下调组,其中miR-709下调组和下调对照组加顺铂刺激.应用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,分光光度法检测含半肮氨酸的天冬氨酸水解酶(Caspase-3)活性,Western blot法和RT-PCR检测上皮细胞标志蛋白E-cadherin及其mRNA的变化.JC-1(线粒体膜电位)荧光探针检测线粒体膜电位,流式细胞术检测线粒体超氧化物(mitoSOX)生成,PCR检测线粒体基因(mtDNA)拷贝数.结果 miR-709在5 μmol/L顺铂刺激小管上皮细胞后开始明显升高(F =22.17,P＜0.05),10μmol/L顺铂刺激12 h开始明显升高(F=33.462,P＜0.05);过表达miR-709后细胞凋亡数目、Caspase-3活性较上调对照组增加,E-cadherin表达较上调对照组下降,差异均有统计学意义(凋亡:1.54±0.20比1.00±0.23;Caspase-3活性:1.27±0.08比0.97 ±0.08;E-cadherin:0.47 ±0.15比1.00±0.10;t=-3.086、-5.882、5.671,P均＜0.05);线粒体功能指标线粒体膜电位、mtDNA拷贝数较对照组降低,mitoSOX生成较对照组增加,差异均有统计学意义(JC-1:0.80±0.04比1.05±0.08;mtDNA:0.58 ±0.15比1.00±0.75;mitoSOX:1.31±0.16比1.00±0.05;t =4.687、4.943、-3.694,P均＜0.05).而顺铂刺激后,miR-709下调组细胞凋亡数目、Caspase-3活性较下调对照组降低,E-cadherin表达较下调对照组增高,差异均有统计学意义(凋亡:1.35±0.10比1.86±0.44;Caspase-3活性:1.04±0.12比1.30±0.09;E-cadherin:0.86±0.08比0.54±0.05;F=18.489、20.932、33.323,P均＜0.05);线粒体膜电位、mtDNA拷贝数较对照组增加,mitoSOX生成较下调对照组降低,差异均有统计学意义(JC-1:0.94±0.06比0.75±0.05;mtDNA:0.68±0.09 比0.27±0.12;mitoSOX:0.91 ±0.09比1.22 ±0.08;F =21.726、59.330、23.813,P均＜0.05).结论 miR-709可能通过负性调控线粒体功能参与顺铂引起的肾小管上皮细胞损伤.

关键词：顺铂、线粒体功能、microRNA-709、肾小管上皮细胞损伤

所属期刊栏目：30

分类号：R737.9;R361.3;R285.5

资助基金：国家自然科学基金81170635

在线出版日期：2019-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：711-714