稳定表达人源GRM4基因的乳腺癌细胞株的筛选及鉴定

摘要：

目的 构建重组人源GRM4基因慢病毒载体,筛选稳定表达GRM4蛋白的乳腺癌MDA-MB-231细胞株.方法 PCR扩增GRM4基因片段,扩增产物连接到带有绿色荧光蛋白GFP的慢病毒栽体表达质粒中,构建重组荧光慢病毒质粒GFP-GRM4,同时以慢病毒空载体作为阴性对照组;将GFP-GRM4与包装质粒pMD2.G、psPAX2共转染293T包装细胞中,24h后观察荧光表达情况及被感染细胞的形态;48 h后收集病毒上清液,以病毒上清液感染乳腺癌MDA-MB-231细胞,利用嘌呤霉素抗性筛选稳定表达GRM4蛋白的细胞株;采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测细胞系中GRM4基因的转录及蛋白表达量.结果 DNA测序证实重组慢病毒质粒构建成功;重组慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞后,获得表达GRM4的重组慢病毒;乳腺癌MDA-MB-231细胞经慢病毒感染、药物筛选后,可在荧光显微镜下观察到明显的绿色荧光;实时荧光定量PCR和Western blot结果表明稳定表达株中GRM4表达水平显著高于对照组(P＜0.01).结论 成功构建了重组GRM4基因的慢病毒表达载体,筛选出稳定表达GRM4的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,为进一步明确GRM4在乳腺癌的发生发展中的作用机制奠定了基础.

关键词：GRM4、慢病毒载体、乳腺癌、稳定表达

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分类号：R737.9(肿瘤学)

资助基金：2017年度军队后勤科研项目CWH17C017;2018年度广州市科技计划项目201804010186

在线出版日期：2019-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1050-1052,1056