NRSN2介导的Wnt/β-catenin信号通路在骨肉瘤细胞增殖、分化中的作用及其分子机制

摘要：

目的:探讨神经膜蛋白2(neurensin 2,NRSN2)与骨肉瘤发生之间的相关性和NRSN2在骨肉瘤细胞增殖、分化中的相关分子机制.方法:采用免疫组织化学染色法和实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)实验,检测我院2016年01月至2020年01月收集的30例经病理学明确诊断的经典型骨肉瘤患者骨肉瘤组织标本和对应的正常组织标本中NRSN2的mRNA和蛋白表达水平.采用RT-qPCR和Western blot实验,分别检测MG63、Saos2、U2OS三种骨肉瘤细胞系中NRSN2的mRNA和蛋白水平.三种骨肉瘤细胞系中选择NRSN2相对高表达和低表达的骨肉瘤细胞系,利用RNA干扰技术构建沉默和过表达NRSN2的质粒,利用慢病毒转染法转染到骨肉瘤细胞系,构建沉默和过表达NRSN2的骨肉瘤细胞系.采用Western blot实验检测沉默NRSN2的U2OS骨肉瘤细胞系和过表达NRSN2的MG63骨肉瘤细胞系中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白(p-GSK3β、GSK3β、nu-β-catenin)的表达水平.采用CCK8法检测过表达NRSN2的MG63骨肉瘤细胞系中分别加入0μmol/L、5μmol/L的Wnt/β-catenin抑制剂IWR-1-endo后24 h、48 h、72 h、96 h时骨肉瘤细胞的增殖能力.结果:在骨肉瘤组织标本中NRSN2的阳性表达率明显高于正常组织标本;NRSN2的mRNA表达水平明显高于正常组织标本(P<0.01).三种骨肉瘤细胞系中NRSN2的mRNA和蛋白表达水平均显著高于成骨细胞hFOB1.19(P<0.01);U2OS和Saos2骨肉瘤细胞系中NRSN2的mRNA和蛋白表达水平高于MG63骨肉瘤细胞系(P<0.05).沉默NRSN2的U2OS骨肉瘤细胞系中p-GSK3β、nu-β-catenin的蛋白表达水平明显低于未转染组和重新上调NRSN2组的蛋白表达水平;过表达NRSN2的MG63骨肉瘤细胞系中p-GSK3β、nu-β-catenin的蛋白表达水平明显高于空质粒组;未加入IWR-1-endo的过表达NRSN2组细胞增殖能力在48 h、72 h和96 h均高于加入IWR-1-endo组(均P<0.01);未加入IWR-1-endo的空质粒NRSN2组骨肉瘤细胞增殖能力在48 h、72 h和96 h均高于加入IWR-1-endo抑制剂组(均P<0.05).结论:本研究探讨了NRSN2与骨肉瘤发生之间的相关性,且NRSN2通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进骨肉瘤细胞增殖、分化.

关键词：骨肉瘤、NRSN2、Wnt/β-catenin信号通路

所属期刊栏目：30

分类号：R738.1(肿瘤学)

资助基金：新疆维吾尔自治区自然科学基金2017D01C010

在线出版日期：2022-06-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1537-1542