PSMA/4-1BBL共转染DC疫苗联合CIK细胞体外抑制前列腺癌的实验研究

摘要：

目的:本研究通过复制缺陷性腺病毒介导的人前列腺特异性膜抗原基因(PSMA)和肿瘤坏死因子配体超家族成员(4-1BBL)体外共同转染树突状细胞(DC)后,与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养,观察其体外抑制前列腺癌的生物学效应.方法:将Ad-PSMA、Ad-4-1BBL、Ad-GFP按MOI=200∶1转染DC作为刺激细胞,分为共转染组、PSMA转染组、4-1BBL转染组、阴性对照组(Ad-GFP-DC组)以及未转染DC组,Western blot法检测各组DC细胞中PSMA和4-1BBL蛋白的表达；流式细胞仪分析CD80、CD83、CD86等表型变化；取患者外周静脉血单个核细胞中淋巴细胞用于CIK细胞的诱导培养,按DC∶ CIK=1∶10比例将上述不同转染组DC加入CIK中,共同孵育96h(设普通DC刺激组和单独CIK细胞组为对照),收获的细胞作为效应细胞,流式细胞仪测定不同DC刺激组CIK细胞CD3、CD56表达率,ELISA法检测不同DC-CIK组培养上清IFN-γ、IL-10水平；PE-7AAD凋亡试剂盒检测不同DC-CIK组对人前列腺癌细胞株LNCap、Du145的细胞毒作用.结果:Western blot结果证实PSMA、4-1BBL可在DC上成功表达；各转染组DC表面CD80、CD83、CD86、HLA-DR共刺激分子表达上调,与未转染组相比较差异显著(P＜0.05).培养14d,不同DC疫苗刺激组CIK以及单独CIK细胞组中CD3+、CD56+、CD3 +/CD56+T细胞比例均高于培养7d的CIK,差异显著(P＜0.05),其中经不同DC疫苗刺激的CIK组上升较单独培养14d-CIK组更明显(P＜0.05).DC-CIK培养上清中PSMA/4-1BBL-DC-CIK组IFN-γ分泌量最高,达1176.10±14.37pg/5×106cells,IL-10分泌量最低,为75.14 ±2.01 pg/5×106cells,与其他各组比较,差异显著(P＜0.05).不同组别DC-CIK作用于LNCap、Du145细胞24h后,荧光显微镜下观察细胞凋亡和坏死明显.同一组别DC疫苗刺激下的CIK细胞对LNCap的杀伤作用强于DU145细胞,差异显著(P＜0.05).而在针对同一种肿瘤细胞时,PSMA/4-1BBL-DC-CIK组的杀伤作用最强,LNCap细胞的凋亡率可达(24.56 ±1.68)％,Du145细胞凋亡率可达(12.67±0.94)％,与PSMA-DC-CIK组、4-1BBL-DC-CIK组相比,差异显著(P＜0.05),而PSMA-DC-CIK和4-1BBL-DC-CIK组的前列腺癌细胞的凋亡率则无显著差异(P＞0.05),但与GFP-DC-CIK、普通DC-CIK、和单独CIK组相比差异显著(P＜0.05).结论:本实验中Ad-PSMA/4-1BBL高效转染的DC具有成熟DC的典型特征,与CIK共培养后提高了CD3 +/CD56+T细胞比例,IFN-γ分泌量显著增高,并增加了对PSMA阳性靶细胞的特异性杀伤,比普通DC-CIK及单独CIK具有更强的杀伤活性.两种肿瘤相关抗原转染DC与CIK共培养后可以更有效地提高CIK细胞的杀伤活性.

关键词：树突状细胞、PSMA基因、4-1BBL基因、细胞因子活化杀伤细胞(CIK)

所属期刊栏目：21

分类号：R73-36+2;R737.25(肿瘤学)

资助基金：辽宁省科技厅科学技术计划项目2010225034

在线出版日期：2013-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1905-1910