Fascin真核表达载体的构建及其在肺癌A549细胞中的表达

摘要：

目的:构建fascin基因的pcDNA3.1(+)表达载体pcDNA3.1(+)-fascin,将其转染肺癌A549细胞,观察其表达,并检测转染前后细胞内F-肌动蛋白(F-actin)的变化.方法:应 用RT-PCR从 Hela细胞中扩增fascin基因,酶切后和真核表达载体pcDNA3.1(+)重组,获得重组表达载体pcDNA3.1(+)-fascin.经酶切、电泳,DNA测序鉴定后,将其及对照空载体转染肺癌A549细胞,采用Western blotting检测fascin在A549细胞中的表达情况;免疫荧光染色后采用激光共聚焦显微镜观察fascin对F-actin的影响.结果:成功克隆fascin基因片段,并将其重组到pcDNA3.1(+)载体中,经酶切及DNA测序鉴定正确.pcDNA3.1(+)-fascin转染A549细胞,Western blotting鉴定转染后fascin在A549细胞中高表达.激光共聚焦显示fascin基因能够在A549细胞内促进F-actin形成丝状突出.结论:成功构建了pcDNA3.1(+)-fascin真核表达载体,并将其转染肺癌A549细胞;激光共聚焦观察显示fascin能够促进A549细胞内F-actin形成丝状突出,可能是促进A549细胞转移的结构基础之一.

关键词：非小细胞肺癌、成束蛋白fascin、A549细胞、丝状突出

所属期刊栏目：19

分类号：R730;R734.2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81001041;第四军医大学唐都医院苗子人才基金

在线出版日期：2011-11-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2157-2160