实时定量聚合酶链反应结合Taqman荧光探针JCV-P检测肾移植受者JC病毒
目的:建立肾移植受者尿液和外周血JC病毒(JCV)感染实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法。方法针对JCV基因组设计特异性引物JCV-F和JCV-R ,Taqman荧光探针JCV-P ,探针的5′端标记有荧光基团,在除5′端外的任意一个位置上标记有淬灭基团;然后处理待测样本,进行PCR反应,建立重组质粒标准曲线,评价特异性、灵敏度、重复性。结果将检测阳性的扩增产物进行基因测序,测序结果经BLAST 比对后证实JC V基因序列;利用上述方法对86份样本进行检测:20份JC V血清样本及20份JC V尿液样本检测均为阳性,有S型扩增曲线,动态范围测定显示103~1010拷贝/m L标准曲线具有良好的相关性;20份健康人尿液样本和20份血液样本及6份临床常见的其他病原体血液样本检测均为阴性,无S型扩增曲线。结论实时荧光定量PCR结合Taqman荧光探针JCV-P检测肾移植术后患者JCV方法可用于肾移植术后JCV感染的的早期诊断,对预防JCV感染造成的多瘤病毒相关性肾病(PVAN)和进行性多灶性脑白质病(PML)具有一定意义。
聚合酶链反应、肾移植、JC病毒
R73;S85
国家自然科学基金面上项目31371395国际发明专利专利号20111021891.1
2014-02-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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