组蛋白去乙酰化酶3真核表达载体的构建和鉴定

摘要：

目的 利用pEGFP-N1真核表达载体构建组蛋白去乙酰化酶3真核表达载体pEGFP-Hdac3,并鉴定其在大鼠肝癌细胞系CBRH-7919中的表达.方法 利用大鼠肝脏cDNA为模板,聚合酶链反应(PCR)获取目的 基因Hdac3;用HindⅢ、BamH I双酶切真核表达载体pEGFP-N1和目的 基因Hdac3,用T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒.利用测序正确的重组体转染CBRH-7919细胞,检测Hdac3和PPAR-γ的mRNA表达.结果 利用基因克隆技术获得组蛋白去乙酰化酶3的真核表达载体pEGFP-Hdac3重组质粒.PCR,双酶切,DNA测序证实目的 基因Hdac3已成功插入pEGFP载体中.用重组质粒转染大鼠肝癌细胞系CBRH-7919后Hdac3 mRNA表达显著升高、而PPAR-γ mRNA表达明显降低.结论 本研究成功构建了蛋白去乙酰化酶3的真核表达载体pEGFP-Hdac3.

关键词：组蛋白脱乙酰基酶类、真核表达载体pEGFP-N1、基因表达、重组质粒

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分类号：R73;R39

资助基金：国家自然科学基金30400249,30571725,30630058;陕西省国际合作项目2007-kw-06;陕西省自然科学基金2004C256,2010K16-04;2010年中央高校基本科研业务费专项基金xjj20100031;2009年西安交通大学校基金

在线出版日期：2013-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：107-110