谷氨酰胺对肿瘤坏死因子-α引起的肠上皮紧密连接损害的保护作用

摘要：

目的 探讨谷氨酰胺(GLN)保护肠黏膜屏障功能的作用机制.方法 Caco-2细胞(20～30代)细胞培养7 d后进行实验.实验分4组:对照组加入正常培养液,肿瘤坏死因子(TNF)-α组加入100 mg/L的TNF-α,低浓度GLN组加入4 mmol/L GLN和100 mg/L的TNF-α,高浓度GLN组加入10 mmol/L GLN和100 mg/L的TNF-α,培养24 h后,应用免疫荧光染色检测紧密连接蛋白occludin的定位、表达;并应用不同裂解液制备NP-40可溶性及不溶性蛋白框架,分别进行蛋白印迹杂交以检测磷酸化和非磷酸化的occludin蛋白含量.结果 Western blotting分析显示occludin蛋白有两种表达形式,一种为65 000(非磷酸化occludin),主要存在于NP-40可溶性蛋白样品中;另一种为85 000(磷酸化occludin),只存在于NP-40不溶性蛋白样品中.各组65 000 occludin蛋白的表达差异无统计学意义,但TNF-α组85 000 aoccludin蛋白表达较对照组明显下降(P＜0.05),低浓度GLN组85 000 aoccludin蛋白表达较TNF-α组有所增加,但差异无统计学意义(P＞0.05),高浓度GLN组与TNF-α组比较85 000 aoccludin蛋白含量明显增加(P＜0.05).结论 TNF-α可以引起Caco-2细胞紧密连接蛋白occludin的异常分布和磷酸化的减少,GLN可以抑制这一变化.

关键词：连接蛋白类、肿瘤坏死因子α、谷氨酰胺

所属期刊栏目：38

分类号：R39;S85

资助基金：国家自然科学基金30670947

在线出版日期：2013-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：491-493