高效液相排阻色谱技术在抗哇巴因多克隆抗体制备中的应用

摘要：

目的:探讨高效液相排阻色谱技术(HPSEC)在抗哇巴因多克隆抗体的制备及纯化中应用的意义.方法:免疫新西兰大白兔制备出抗哇巴因多克隆抗体.在优化色谱条件下,应用HPSEC技术纯化抗哇巴因多克隆抗体.采用酶联免疫吸附法(ELISA)及考马斯亮兰法进行定性、定量分析,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度.分别选用三种标准蛋白.在优化的色谱条件下,分别测定标准蛋白的洗脱体积,并根据分子量的对数与洗脱体积绘制标准曲线.在相同的色谱条件下,测定抗哇巴因多克隆抗体的洗脱体积,从而测定分子量.结果:优化的色谱条件为流动相0.05mol/L的磷酸盐缓冲液,pH 6.0,流速0.30ml/min,进样量5μl.纯化后抗体效价1:50,蛋白浓度20μg/ml.纯化后抗体电泳图谱仅可见一条色谱带.在优化的色谱条件下,测得抗哇巴因多克隆抗体的分子量为166kD.结论:HPSEC是一种有效、快速纯化抗哇巴因多克隆抗体的方法,为日后制备高纯度、高活性的抗哇巴因多克隆抗体奠定基础.同时HPSEC也是测定分子量的有效方法.

关键词：高效液相排阻色谱法、多克隆、哇巴因、动物、实验

所属期刊栏目：30

分类号：R4(临床医学)

在线出版日期：2004-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：707-710