自制红细胞裂解液对流式细胞术测定外周血T淋巴细胞亚群的影响研究

摘要：

目的 比较实验室配制的红细胞裂解液的裂解时间对流式测定SD大鼠和食蟹猴外周血T淋巴细胞亚群的影响.方法 ①取15只食蟹猴的肝素钠抗凝血各50μl,血样与荧光检测抗体PerCP-CD3/FITC-CD8/PE-CD4孵育后分别经自制和市售红细胞裂解液裂解一段时间,比较样本经自制与市售裂解液处理不同时间后其 CD3+CD4+,CD3+CD8+和CD3+淋巴细胞的平均荧光强度(median fluorescence intensity,MFI)等数值的差异;②取 15只SD大鼠的EDTA-K2 抗凝血各50μl,血样与荧光检测抗体APC-CD3/FITC-CD4/PE-CD8a孵育后,分别经自制红细胞裂解液和市售裂解液裂解一段时间,比较样本经自制与市售裂解液处理不同时间后CD3+CD4+和CD3+CD8+淋巴细胞的MFI等数值的差异;③取15只大鼠EDTA-K2 抗凝血各50 μl,血样与荧光检测抗体APC-CD3/PE-CD4孵育后,分别经自制红细胞裂解液和市售裂解液裂解一段时间,比较样本经自制与市售裂解液处理不同时间后PE-CD4+的MFI差异.结果 ①食蟹猴外周血经自制红细胞裂解液,裂解时间约15min和5min的FITC-CD8+的MFI分别为1745±173和2439±253,淋巴细胞百分比分别为47.9%±7.2%和 42.1%±7.6%;裂解时间约15min和5min的PE-CD4+的MFI分别为12924±892 和13695±984,淋巴细胞百分比分别为38.7%±7.2%和 33.1%±7.2%.裂解时间约15min比裂解 5min的FITC-CD8+(t=8.779,P＜0.0001)和PE-CD4+(t=2.250,P＜0.05)的MFI降低;淋巴细胞百分比占比(t=2.139,2.162,均P＜0.05)增高,差异具有统计学意义.食蟹猴外周血经市售红细胞裂解液裂解15min,FITC-CD8+,PE-CD4+,PerCP-CD3+的MFI分别为2413±240,12428±1208和1015±123.与自制裂解液裂解5min比较,市售裂解液裂解15min的PE-CD4+和PerCP-CD3+的MFI降低,差异具有统计学意义(t=3.150,4.862,均P＜0.01).②SD大鼠外周血经自制红细胞裂解液,裂解时间5min和 2min的FITC-CD4+的MFI分别为55.72±14.10和225.08±12.44;裂解5min与裂解2min的FITC-CD4+的MFI比较差异有统计学意义(t=34.89,P＜0.001);SD大鼠外周血经市售红细胞裂解液,裂解5min和15min的FITC-CD4+的MFI分别为 277.02±30.36 和 310.04±43.56,PE-CD8a+的MFI分别为 3453.43±443.19 和 3211.28±357.85;裂解时间 5min与裂解15min的FITC-CD4+和PE-CD8a+的MFI比较差异有统计学意义(t=2.409,P＜0.01).③SD大鼠经自制红细胞裂解液,裂解5min和2min的PE-CD4+的MFI分别为1766±67,1765±51,差异无统计学意义(t=0.045,P＞0.05).结论 与市售裂解液比较,自制红细胞裂解液可缩短裂解时间.将FITC荧光抗体更换为PE荧光抗体后,在一定的裂解时间内可消除对大鼠测定淋巴细胞MFI的影响;但随着裂解时间延长会造成FITC和PE荧光抗体MFI值的下降.

关键词：红细胞裂解液、流式细胞测定法、外周血T淋巴细胞亚群、食蟹猴、SD大鼠、荧光标记

所属期刊栏目：38

分类号：R446.11(诊断学)

资助基金：国家重点研发计划;中国食品药品检定研究院关键技术研究基金

在线出版日期：2023-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：165-170