ALKBH5调控GEFT的m6A修饰对胆管癌转移及EMT的实验研究

摘要：

目的 探究alkB同源蛋白 5(ALKBH5)调控鸟嘌呤核苷酸交换因子T(guanine nucleotide exchange factors T,GEFT)的m6A修饰对胆管癌转移和上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法 将HuCCT1 细胞按照转染类别分为Control组,NC-sh组、ALKBH5-sh组、NC-LV组、ALKBH5-LV组、ALKBH5-LV+NC-sh组和ALKBH5-LV+GEFT-sh组.Control组细胞不进行转染,使用Lipofectamine 2000 对其他组细胞分别转染相应的慢病毒.采用MTT法检测细胞增殖水平,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭水平.采用RT-qPCR分析HuCCT1 细胞中的ALKBH5,GEFT,Bax,Bcl-2,MMP2,MMP9,E-cadherin,N-cadherin和Vimentin的mRNA水平.采用Western blot分析HuCCT1 细胞中的ALKBH5 和GEFT蛋白水平.采用MeRIP-qPCR分析HuCCT1 细胞中GEFT m6A甲基化水平.结果 与Control组和NC-sh组比较,ALKBH5-sh组ALKBH5 和GEFT的mRNA和蛋白水平降低,相对细胞活力降低,细胞凋亡率和Bax mRNA水平升高,Bcl-2 mRNA水平降低,迁移和侵袭细胞数量降低,MMP2 和MMP9 mRNA水平降低,E-cadherin mRNA水平升高,N-cadherin和Vimentin水平降低,GEFT m6A甲基化水平升高,差异具有统计学意义(F=43.347～1 995.868,均P<0.001).与Control组和NC-LV组比较,ALKBH5-LV组ALKBH5 和GEFT的mRNA和蛋白水平升高,相对细胞活力升高,细胞凋亡率和Bax mRNA水平降低,Bcl-2 mRNA水平升高,迁移和侵袭细胞数量升高,MMP2 和MMP9 mRNA水平升高,E-cadherin mRNA水平降低,N-cadherin和Vimentin水平升高,GEFT m6A甲基化水平降低,差异具有统计学意义(F=42.421～720.275,均P<0.001).与ALKBH5-LV+NC-sh组比较,ALKBH5-LV+GEFT-sh组GEFT的mRNA和蛋白水平降低,相对细胞活力降低,细胞凋亡率和Bax mRNA水平升高,Bcl-2 mRNA水平降低,迁移和侵袭细胞数量降低,MMP2 和MMP9 mRNA水平降低,E-cadherin mRNA水平升高,N-cadherin和Vimentin水平降低,差异具有统计学意义(t=7.175～77.872,均P<0.001).结论 ALKBH5 和GEFT均促进胆管癌细胞的生长和转移,ALKBH5 可能通过调控GEFT m6A甲基化修饰来影响胆管癌的转移及EMT.

关键词：胆管癌、m6A甲基化、alKB同源蛋白、鸟嘌呤核苷酸交换因子、上皮间充质转化

所属期刊栏目：38

分类号：R735.8;R730.43(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金;陕西省自然科学基础研究计划项目;西安市科技计划项目

在线出版日期：2023-08-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1-7,21