基于LAMP技术针对溶藻弧菌gyrB基因快速检测方法的建立

摘要：

目的 应用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立针对溶藻弧菌gyrB基因的快速检测方法.方法 以溶藻弧菌标准株(ATCC-17749)和溶藻弧菌野生株(WT)为研究对象,通过在线生物学软件(http://primerexplorer.jp/e/)设计针对溶藻弧菌gyrB基因的LAMP引物,利用恒温水浴进行等温扩增,优化反应条件,建立快速检测方法.结果 ①经2g/dl凝胶电泳结果显示反应温度为61℃时扩增产物成像效果较60℃,62℃和63℃明显,为适宜反应温度;②在61℃条件下反应60 min和90 min凝胶电泳成像效果差异不大,反应时间为60 min能满足扩增需要;③利用同一体系对临床6种其它常见致病菌进行等温扩增时未出现阳性条带,提示整个体系特异度较好;④采用模板稀释法验证该LAMP体系检测的灵敏度为10-4mg/L.结论 建立了基于LAMP技术针对溶藻弧菌gyrB基因的快速检测方法,具有良好的特异度和敏感度,对快速检测溶藻弧菌有重要意义.

关键词：环介导等温扩增技术、弧菌、溶藻弧菌、快速检测、gyrB基因

所属期刊栏目：34

分类号：R378.3;Q503(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：军队后勤科研重点项目,编号:BHJ14J005

在线出版日期：2020-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：6-9