空肠弯曲菌TaqMan-MGB双重探针实时荧光定量PCR快速检测

摘要：

目的 开发一种特异、灵敏的TaqMan MGB双重探针实时荧光定量PCR方法,用于空肠弯曲菌的快速定量检测.方法 针对空肠弯曲菌鞭毛蛋白A和马尿酸酶基因设计特异性引物和探针,建立一种新型TaqMan-MGB双重探针实时荧光定量PCR检测空肠弯曲菌方法,对该方法的定量检测线性范围、特异度、灵敏度、重复性、稳定性进行评价,应用该方法对临床标本中的空肠弯曲菌进行检测,同时用细菌培养、普通PCR、基因克隆和测序鉴定.结果 建立的空肠弯曲菌TaqMan MGB双重探针实时荧光定量PCR检测方法专属性强,能准确检出空肠弯曲菌,而与其他细菌无交叉反应,特异度为100％.该技术灵敏度高,能精确定量检测空肠弯曲菌DNA线性范围达10个数量级,最低检测限为4个菌落形成单位.重复性和稳定性良好,组内和组间相对标准偏差均小于1％.应用该方法成功从78例临床标本中定量检出28例空肠弯曲菌阳性标本,用普通PCR和基因克隆测序分析确认,细菌培养方法仅获得6株存活的空肠弯曲菌.结论 TaqMan MGB双重探针实时荧光定量PCR具有快速简便、可靠稳定、特异灵敏的优点,可用于临床标本中空肠弯曲菌定量检测,值得推广应用.

关键词：空肠弯曲菌、鞭毛蛋白A、马尿酸酶、TaqMan-MGB探针、实时荧光定量PCR、快速检测

所属期刊栏目：34

分类号：R378,2;Q503(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2020-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1-5,15