时间分辨免疫荧光法检测结核感染T细胞释放γ-干扰素的方法建立及初步临床应用

摘要：

目的 建立一种检测结核感染T细胞释放 γ-干扰素(IFN-γ)的时间分辨免疫荧光法(TRFIA)及初步临床应用.方法 选择73例结核分枝杆菌阳性的肺结核患者,77例结核分枝杆菌阴性的肺结核患者,25例肺外结核患者,52例呼吸道疾病以外的非结核患者,70例非结核呼吸道疾病(含肺癌)患者作为研究对象.利用早期分泌抗原靶蛋白6(ESAT6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)作为结核分枝杆菌特异性抗原,刺激患者全血标本中的结核分枝杆菌抗原特异性T细胞释放IFN-γ.植物血凝素L作为有丝分裂原,可非特异地刺激IFN-γ的产生.应用双抗体夹心TRFIA定量测定血浆中的IFN-γ浓度.评价TRFIA检测IFN-γ的精密度、检测低限、生物检测限、功能灵敏度、线性、准确度和特异度等分析性能指标,并与酶联免疫法(ELISA)进行比对试验研究.方法间结果差异比较采用χ2检验,P<0.05为差异具有统计学意义.结果 TRFIA检测IFN-γ的捕获抗体包被浓度为5.0μg/ml,生物素标记抗体使用工作稀释度为1:1800和铕标记物使用工作稀释度为1:500;实验内变异系数(CV)<5％,实验间CV<10％;检测低限0.69 pg/ml,生物检测限0.90 pg/ml,功能灵敏度1.80 pg/ml;线性范围2～5000 pg/ml;检测国际生物标准参考品的偏倚不超过5％;其他常见的细胞因子和常见内源性干扰物(胆红素、血红蛋白和三酰甘油)样本对该方法检测结果无明显影响.TRFIA检测297例临床样本结果判断与临床诊断的一致率可达85.19％;TRFIA与ELISA的结果具有高度一致性(κ=0.9931),且TRFIA与ELISA的阳性检出率结果差异无统计学意义(χ2=0,P>0.05).结论 TRFIA检测IFN-γ的精密度好,灵敏度高,线性范围宽,准确度好,特异度强,临床符合率高,能满足临床检测需要.

关键词：结核分枝杆菌、T细胞、γ-干扰素释放试验、时间分辨免疫荧光法、性能评估

所属期刊栏目：33

分类号：R378.911;R392-33(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2018-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：21-25