肺炎支原体基因组DNA一步法提取在可视化环介导等温扩增体系中的应用研究

摘要：

目的 探究建立肺炎支原体(Mp)基因组DNA一步提取方法,应用于显色肺炎支原体环介导等温扩增(LAMP)体系,以期研制出高灵敏度和高特异度肺炎支原体的检测方法.方法 分别用5种方法提取肺炎支原体培养液基因组DNA,并分别从Mp DNA的纯度、产量、操作步骤、仪器设备和提取时间方面进行比较;最后将5种方法提取的基因组DNA同时应用于已建立的可视化LAMP体系检验提取效果;选取2016年1月～3月20例支原体肺炎住院患儿的咽拭子标本,并用改良后的ROSE法提取咽拭子标本,并鉴定提取效果.结果 提取纯度上,ROSE法和其他四种方法进行两两比较,差异均具有统计学意义(P均＜0.05),即ROSE法略好于碱裂解法和煮沸法,但低于CTAB法和试剂盒法;产量上,ROSE法和其他四种方法进行两两比较的结果是:和煮沸法比差异无统计学意义(q=0.95,P＞0.05),和其他三种方法比差异有统计学意义(P均＜0.05),因此ROSE法提取的产量要高于碱裂解法、CTAB法和试剂盒法;在仪器设备、操作步骤和提取时间上ROSE法、碱裂解法和煮沸法优于CTAB法和试剂盒法;5种方法提取的DNA均能应用于LAMP反应,除煮沸法外,其余四种方法结果无明显差异.结论 该研究建立了肺炎支原体一步法基因组DNA提取方法,成功应用于显色MpLAMP体系中,真正实现不需要任何贵重仪器即可检测肺炎支原体.

关键词：一步法、DNA提取、肺炎支原体

所属期刊栏目：32

分类号：R375.2;Q781(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：金华市科技计划项目2014-3-034;浙江省科技计划项目2017C37085

在线出版日期：2017-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：82-85