10.3969/j.issn.1671-7414.2016.03.023
继发性肺结核患者治疗初期FOXP3 TSDR DNA去甲基化变化情况分析
目的应用一种 FOXP3 TSDR DNA去甲基化荧光定量PCR技术,并分析该方法在继发性肺结核患者治疗初期变化情况。方法选取2014年6月~2015年5月来深圳市龙华新区慢性病防治中心就诊的继发性肺结核病人47例作为研究组,健康对照40例,分离外周血单个核细胞,筛选 CD4+CD25+T细胞,提取基因组 DNA。利用去甲基化 FOXP3 TSDR特异性引物扩增对照组基因组DNA,通过酶切、克隆和回收纯化等过程构建质粒标准品,优化 FOXP3 TSDR去甲基化实时定量PCR技术,建立CD4+CD25+T细胞比例与 FOXP3 TSDR PCR 拷贝换算关系,用该方法分析对照组和研究组0周及治疗后2,4和8周时的调节T细胞频率(FOXP3 TSDR去甲基化),应用 spss16.0软件统计分析实验所得数据。结果0周时47例研究组抗酸染色均为阳性,对照组均为阴性。以抗酸染色结果分组:对照组、抗酸(1+)组、抗酸(2+)组、抗酸(3+)组和抗酸(4+)组其调节 T细胞频率分别为1.63%±0.70%,1.96%±0.10%,1.32%±0.32%,0.86%±0.21%和0.53%±0.12%,抗酸(2+)组与对照组差异无统计学意义,抗酸(3+)组与对照组差异有统计学意义。研究组0,2,4和8周时调节T细胞频率均值、范围及95%可信区间分别为1.05%(0.32%~2.03%),CI(0.93%,1.18%);2.04%(0.95%~3.95%),CI(1.85%,2.24%);3.44%(2.35%~4.95%),CI(3.27%,3.61%);2.79%,(1.02%~4.27%),CI (2.60%,2.98%)。对照组与研究组0周时人群调节T细胞频率之间差异有统计学意义(t=4.669,P<0.05)。单变量方差分析显示治疗时间对研究组外周血调节T细胞频率(FOXP3 TSDR 去甲基化)水平变化有影响(F=347.2,P<0.001, df=3,组内F=407.4,P<0.001,df=3),治疗时间和分组交互效应呈线性关系(F=678.2,P<0.001,df=1)。结论该方法敏感、特异,可以用于继发性肺结核患者的疗效监测。
继发性肺结核、调节T细胞去甲基化区域(treg-specific demethylated region FOXP3 TSDR)、叉头状/翅膀状螺旋转录因子(forkhead box P3 protein、Foxp3)
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R521.5;R392.11(结核病)
2015年深圳市科技研发资金项目第二批基础研究项目JCYJ20150325103202291。
2016-06-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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