10.3969/j.issn.1671-7414.2016.03.009
抗 HPV18 E6多肽单克隆抗体的制备及鉴定
目的制备特异性抗人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18 E6多肽抗体。方法通过在线分析软件AB-Cpred和Bcepred预测 HPV 18E6特异性多肽序列,将多肽序列与牛血清蛋白(bovine albumin,BSA)偶联,以偶联后多肽为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗 HPV18 E6多肽单克隆抗体;以 HPV18阳性分泌物标本DNA为模板,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)获得 HPV 18 E6基因,将该基因插入表达质粒 pET-28a,转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导目的蛋白表达;采用 Western Blot方法鉴定抗 HPV18 E6多肽抗体与目的蛋白的反应性。结果建立的杂交瘤细胞株能稳定产生 HPV18 E6多肽单克隆抗体;重组表达质粒 pET-28a-HPV18 E6测序证明构建正确,成功表达 HPV18 E6蛋白;纯化后的抗 HPV 18 E6多肽抗体可特异性识别原核表达 HPV 18 E6蛋白。结论成功制备抗 HPV18 E6多肽序列,该抗体具有较好的特异性。
人乳头瘤病毒、18E6、多肽、单克隆抗体
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R392-33
上海市科委引导项目124119b1602,134119b1900;普陀区科委重大课题2012PTKW001。
2016-06-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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