多通道Taqman-探针荧光定量PCR鉴定MRSA方法的建立

摘要：

目的建立基于mec A／nuc／fem B三基因联合的 Taqman-探针荧光定量 PCR鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的方法。方法以常规检验标本中分离和采用 VITEK 2 Compact微生物分析仪鉴定为凝固酶阳性的 MRSA为研究对象，通过PrimerPremier5.0和Beacon Designer 7软件设计针对mec A／nuc／fem B特异性PCR引物及Taqman荧光探针，荧光探针5’端分别采用 FAM，HEX及 ROX标记，3’端采用BHQ1标记，在荧光定量PCR仪进行检测。结果①1 g／dl凝胶电泳结果显示mec A／nuc／fem B三个基因引物特异性较好，扩增出的条带分子量与预期分子量一致且未见非特异性扩增；②在单管单通道及单管多通道的 PCR检测中 mec A／nuc／fem B均获得特异性扩增，且三个基因在单管多通道的PCR扩增效果与单管单通道的相类似。结论成功建立了多通道 Taqman-探针荧光定量 PCR鉴定 MRSA的方法， mec A／nuc／fem B三种基因联合检测可有效区分凝固酶阴性和阳性的 MRSA，提高鉴定 MRSA的准确率。

关键词：Taqman-探针、荧光定量PCR、耐甲氧西里金黄色葡萄球菌、基因、联合检测

所属期刊栏目：31

分类号：Q503(一般性问题)

资助基金：国家自然基金项目编号81401311；首都临床特色应用研究，立项编号Z141107006614009；院内创新基金，立项编号CXPY201412。

在线出版日期：2016-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：22-25