梅毒螺旋体四种膜蛋白克隆重组表达和ELISA法建立的应用研究

摘要：

目的：克隆Tp0821，Tp0319，Tp0971和Tp0663基因，构建原核表达质粒，进行重组蛋白的表达、纯化并用于检测梅毒病人血清抗体，从而探讨Tp0821，Tp0971，Tp0319和Tp0663重组蛋白在 Tp感染诊断中的作用，丰富梅毒血清学诊断的候选抗原库。方法从Tp库中筛选Tp0821，Tp0319，Tp0971和Tp0663四种膜蛋白，通过生物信息学软件分析挑选优势抗原表位，与 pQE32载体进行连接分别构建 pQE32／Tp0821，pQE32／Tp0319，pQE32／Tp0971和 pQE32／Tp0663原核表达重组体；进行体外克隆表达与纯化，并分别以单一的 Tp0821，Tp0319，Tp0971，Tp0663及四种重组蛋白嵌合抗原（Tp0821-Tp0319-Tp0971-Tp0663）为包被抗原建立间接Tp-ELISA方法，以TRUST和TPPA法为对照，检测2013年1月～2014年6月深圳市宝安区人民医院门诊及住院Tp阴性患者160例和 Tp阳性83例临床标本，评价其在梅毒血清学诊断中的应用。结果成功构建原核表达载体 pQE32／Tp0821，pQE32／Tp0319，pQE32／Tp0971和 pQE32／Tp0663；高效表达和纯化出各自相对分子质量的重组蛋白。建立的间接 Tp-ELISA法检测160例 Tp阴性和 8 3例 Tp阳性临床标本，与TPPA相比，敏感度分别为85.5％（71／83），84.3％（70／83），89.2％（74／83），81.9％（68／83）及95.2％（79／83），特异度均为100％（160／160），符合率为82.6％～95.7％。单一的 Tp0821，Tp0319，Tp0971和 Tp0663重组蛋白建立的 TP-ELISA的阳性检出率（85.5％，84.3％，89.2％及81.9％）与 TPPA法的阳性检出率（100％）比较差异有统计学显著性意义（χ2＝24.5～31.8，P均＜0.01），而四种重组蛋白嵌合抗原建立的 TP-ELISA的阳性检出率与 TPPA法的阳性检出率比较差异有统计学意义（χ2＝7.95，P＜0.05）。结论制备的 Tp0821，Tp0319，Tp0971和 Tp0663重组蛋白具有良好的免疫活性，为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的应用奠定一定的基础，但以四种重组蛋白嵌合抗原建立的间接 Tp-ELISA法进行Tp血清学诊断，能提高其检测敏感度。

关键词：梅毒螺旋体、Tp0821、Tp0319、Tp0971、Tp0663、酶联免疫吸附试验、血清学试验

分类号：R377.1;R446.61(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：深圳市宝安区科技局资助，项目编号2013151。

在线出版日期：2015-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：75-77,81