常见曲霉菌的实时定量PCR诊断技术的研究

摘要：

目的 建立常见曲霉菌的实时定量PCR诊断技术.方法 针对黄曲霉菌、烟曲霉菌、构巢曲霉菌、黑曲霉菌和土曲霉菌内转录间隔区2(internal transcribed spacer 2,ITS2)保守基因设计引物和探针,通过普通PCR扩增其ITS2基因片段,作为实时定量PCR反应模板,通过实时定量扩增和分析其解链曲线来鉴定常见曲霉菌,同时分析该方法灵敏度.结果 真菌通用引物扩增五种常见曲霉菌ITS2基因DNA片段,大小为350 bp左右.实时定量PCR分析和探针解链曲线分析结果显示土曲霉解链温度(melting temperature,Tm)值为57℃±0.12℃,黄曲霉Tm值为59℃±0.13℃,烟曲霉Tm值为63℃±0.17℃,土曲霉Tm值为66℃±0.15℃,构巢曲霉Tm值为66℃±0.14℃,黑曲霉Tm值为68℃±0.12℃.方法 灵敏度分析显示各曲霉菌最低模板DNA反应浓度分别为烟曲霉51.2· fg/μl,黄曲霉621.3 fg/μl,黑曲霉19.5 fg/μl,土曲霉82.4 fg/μl和构巢曲霉520.8fg/μl.结论 创建一种可快速鉴定五种常见曲霉菌的实时定量PCR诊断技术,该方法特异度好、灵敏度高,符合临床需要,能为侵袭性真菌感染(invasive aspergillosis,IA)提供新的选择.

关键词：曲霉菌、实时定量PCR、内转录间隔区2

所属期刊栏目：27

分类号：R379;Q503(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：2010年深圳科技局项目201003006

在线出版日期：2012-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：30-34