人偏肺病毒亚克隆的构建与鉴定

摘要：

目的 从临床标本中扩增人偏肺病毒(hMPV)基因片段进行亚克隆,为进一步全面深入地研究人偏肺病毒奠定基础.方法 根据GenBank中已知的hMPV全基因序列设计引物.收集呼吸道感染住院患儿鼻咽抽吸物697例,提取病毒核酸,运用长片段RT-PCR技术扩增目的片段,切割含目的条带的凝胶进行纯化,并将目的片段连接到PJET1.2/blunt克隆载体,转化感受态细胞TOP10,经含氨苄青霉素的抗生素平板筛选,得到阳性克隆,提取质粒,最后对重组质粒进行PCR鉴定和测序鉴定.结果 随机选取5例所获的阳性条带经PCR和测序鉴定,证实确为hMPV基因片段.结论 成功构建了hMPV基因组亚克隆,可用于后续的实验研究.

关键词：人偏肺病毒、亚克隆、长片段RT-PCR、重组质粒

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分类号：R373.1;Q786(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2012-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：26-29