APRIL shRNA表达载体的构建与筛选

摘要：

目的 构建并筛选有效的、编码短发夹RNA(shRNA)的增殖诱导配体(APRIL)基因特异性真核表达裁体.方法 分别设计、合成4对寡核苷酸单链,经退火、连接得到APRIL-shRNA双链,定向克隆至带有H1启动子、绿色荧先蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和Neo基因的pGCsi-H1/Neo/GFP质粒裁体中,柏建4条含APRIL基因shRNA的pGCsi-H1/Neo/GFP-APRIL-shRNA真核表达裁体,转染高表达APRIL的结直肠癌细胞株SW480.G418筛选,荧光显微镜下现察转染效率,FQ-RT-PCR检测APRIL mRNA水平,Western印迹分析APRIL蛋白表达.结果 测序证实pGCsiH1/Neo/GFP-APRIL-shRNA(APRIL shRNA)构建成功,无碱基突变,4种不同shRNA质粒转染细胞后APRIL mRNA和蛋白表达差别有统计学显著性意义(P＜0.01).结论 成功地构建APRIL shRNA真核表达裁体,敲低效率85%以上,可用于后续的实验研究.

关键词：增殖诱导配体、短发夹RNA、G418、真核表达载体

所属期刊栏目：25

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：江苏省卫生厅"科教兴卫"医学重点学科资助项目XK200723;南通大学自然科学项目编号092043

在线出版日期：2010-06-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：27-30