舍格伦综合征A抗原(SSA60)在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达及胶体金快速检测方法的建立

摘要：

目的 在巴斯德毕赤酵母中表达舍格伦综舍征A抗原(SSA60)并建立肢体金快速检测方法.方法 表达质粒pPIC9k-SSA60用电穿孔法转化酵母菌SMDI168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和斑点免疫金渗滤法(DIGFA)鉴定.结果 表达产物SSA60的分子量约60 000,高拷贝巴斯德毕赤酵母转化菌的表达水平明显高于低拷贝的,表达量占分泌总蛋白60%以上,产物浓度为600～950 mg/L.DIGFA检测85份舍格伦综合征(SS)患者血清和30份正常人血清,抗SSA检测阳性率为95.3%(81/85),特异度为100%(30/30).与德国欧蒙ENA酶斑点法对比检测的符合率为96.5%(111/115),差异无统计学意义(P>0.05).结论 SSA60在巴斯德毕赤酵母中获得高效分泌表达,DIGFA简便、快速、准确,可用于临床自身免疫病的诊断.

关键词：舍格伦综合征A抗原、分泌表达、巴斯德毕赤酵母、斑点免疫金渗滤法

所属期刊栏目：24

分类号：R442.8;R392-33(诊断学)

资助基金：福建省青年人才科技创新基金资助项目2002J060

在线出版日期：2009-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：37-39