[3H]-油酸标记的大肠杆菌底物测定血清磷脂酶A2活性的方法及评价

摘要：

目的:探讨血清磷脂酶A2(PLA2)活性测定动力学特点并进行方法学评价.方法:采用[3H]-油酸标记大肠杆菌膜为底物,观察不同条件下PLA2的作用特点,选择最适反应条件,并进行方法学评价试验.结果:PLA2的最适pH为8.0～8.5;当Ca 2+≤8 nmol/L时,PLA2活性呈Ca2+浓度依赖性;PLA2催化水解大肠杆菌膜磷脂的反应有底物饱和性,其表观Km为6.0 μmol/L;血清用量在2～14 μl内呈线性关系(r＝0.924 8,P<0.05);蛇毒PLA2在0.5～10 ng范围内呈线性(r＝0.960 4 ,P<0.01);当血清用量为10 μl,反应在25 min内呈线性(r＝0.929 9,P <0.005).批内CV为6.2%,批间CV为9.3%,回收率为92.6%;轻度溶血、1.06 mmol/L的TG及0.16 mmol/L的Triton X-100对该法无明显干扰;48例健康人血清PLA2活力的95%可信区间为461.9～623.2 u/L((x)±t0.05,vS(x)).结论:以[3H]-油酸标记的大肠杆菌膜为底物测定血清磷脂酶A2活力是一种灵敏度极高,特异性较强,准确度满意的放射化学分析法.该法较为简单、快速、适于临床批量测定以及科学研究.

关键词：磷脂酶A2、方法学评价、大肠杆菌膜标记、动力学观察

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分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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