lncRNA MEG8通过调控miR-363-3p/PAX6轴促进非小细胞肺癌的肿瘤进展

摘要：

目的 探讨长非编码RNA母系表达基因8(lncRNA MEG8)通过调控miR-363-3p/人类配对盒基因6(PAX6)轴促进非小细胞肺癌(NSCLC)的肿瘤进展.方法 选取 116 例经确诊为NSCLC患者的肿瘤组织与癌旁正常组织标本,常规培养人NSCLC细胞株 A549、H1299,采用 RT-qPCR 法检测组织和细胞中 lncRNA MEG8、miR-363-3p 和 PAX6 mRNA 的表达.将A549、H1299 细胞分别分为对照组(control 组,空白培养基处理)、pcDNA 组(转染 pcDNA)、pcDNA-MEG8 组(转染 pcDNA-MEG8)、pcDNA-MEG8+miR-NC组(pcDNA-MEG8 与miR-NC共转染)、pcDNA-MEG8+miR-363-3p mimic组(pcDNA-MEG8 与miR-363-3p mimic共转染).CCK-8 法检测培养24,48,72 h各组细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3 和PAX6 蛋白的表达.双荧光素酶报告基因实验分别验证MEG8 和miR-363-3p、miR-363-3p和PAX6 的关系.RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测lncRNA MEG8、miR-363-3p和PAX6 之间的结合.结果 与正常组织相比,肿瘤组织中lncRNA MEG8、PAX6 mRNA高表达,miR-363-3p呈现低表达(均P＜0.05).与control 组和 pcDNA 组相比,pcDNA-MEG8 组培养 48,72 h A549 和 H1299 细胞增殖能力、细胞迁移率、PAX6、Bcl-2 蛋白表达显著升高(P＜0.05),细胞凋亡率和Bax、Caspase-3 蛋白显著降低(P＜0.05).与pcDNA-MEG8 组和pcDNA-MEG8+miR-NC组相比,pcDNA-MEG8+miR-363-3 mimic组培养48,72 h A549 和H1299 细胞增殖能力、细胞迁移率、PAX6、Bcl-2 蛋白表达显著降低(P＜0.05),miR-363-3p表达、细胞凋亡率、Bax、Caspase-3 蛋白表达显著升高(P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR-NC+MEG8-WT共转染组相比,miR-363-3p mimic+MEG8-WT共转染组荧光素酶活性显著降低(P＜0.05);与miR-NC+MEG8-MUT共转染组相比,miR-363-3p mimic+MEG8-MUT共转染组荧光素酶活性无显著差异(P＞0.05).与miR-NC+PAX6-WT共转染组相比,miR-363-3p mimic+PAX6-WT共转染组荧光素酶活性显著降低(P＜0.05);与miR-NC+PAX6-MUT共转染组相比,miR-363-3p mimic+PAX6-MUT共转染组荧光素酶活性无显著性差异(P＞0.05).RIP实验结果显示,与IgG处相比,lncRNA MEG8 和miR-363-3p、miR-363-3p和PAX6 均主要富集在Ago2 处,IgG处与Ago2 处的lncRNA MEG8、miR-363-3p和PAX6RNA相对表达水平均具有统计学差异(P＜0.05),提示lncRNA MEG8 和miR-363-3p、miR-363-3p和PAX6 能靶向结合.结论 过表达lncRNA MEG8 可能通过下调miR-363-3p并促进PAX6 蛋白的表达,进而促进NSCLC的进展.

关键词：母系表达基因8、miR-363-3p/人类配对盒基因6、非小细胞肺癌、细胞凋亡、细胞增殖、细胞迁移

所属期刊栏目：54

分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：湛江市科技计划项目2022B01089

在线出版日期：2023-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：416-424