小鼠Cdc25B突变型S15A荧光表达载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建小鼠Cdc25B的突变型Cdc25B(S15A)的荧光表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B(S15A)-EGFP,并观察其在真核细胞中的表达以验证载体是否构建成功.方法 利用PCR技术从质粒模板上扩增荧光表达的EGFP目的基因,将其与pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B(S15A)载体连接,利用限制性内切酶XbaⅠ和BamHⅠ进行双酶切电泳后做测序鉴定,构建pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B(S15A)-EGFP荧光表达载体,利用脂质体法使其转染HEK293感受态细胞,通过Western blot法检测细胞内荧光质粒的表达.结果 荧光表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B(S15A)-EGFP构建成功,将其转染至HEK293感受态细胞,于48 h后提取细胞蛋白,利用Western blot法检测到细胞内荧光表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B(S15A)-EGFP成功表达,并且测序结果与预期一致.结论 成功构建了荧光表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B(S15A)-EGFP.

关键词：荧光表达载体、Cdc25B(S15A)、HEK293细胞

所属期刊栏目：52

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2021-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：695-699