基因组不稳定肝细胞CDT1基因过表达和RNAi慢病毒载体的构建

摘要：

目的 构建基因组不稳定细胞CDT1基因过表达和RNAi模型,为进一步探讨该基因在辐射诱发基因组不稳定的功能提供研究工具.方法 根据CDT1基因信息,以慢病毒载体GV218设计合成两种重组质粒,分别包含CDT1基因全长序列以及阴性对照序列;以慢病毒载体GV248设计合成两种重组质粒,分别包含CDT1基因的小干扰序列以及用于干扰对照的阴性序列.利用Western blot和qPCR进行过表达和RNAi重组质粒表达的检测.通过转染293T细胞进行慢病毒的包装.利用ELISA和荧光法分别进行滴度的检测.再用包装好的慢病毒感染辐射诱导基因组不稳定性HL-7702肝细胞,利用qPCR检测CDT1表达量.结果 测序结果表明重组质粒构建成功,并能够有效转染293T.过表达病毒滴度为4.3×108 TU/ml;RNAi病毒滴度为2.0×108 TU/ml.过表达慢病毒能有效上调CDT1的表达,过表达效率为65％.RNAi干扰慢病毒能够有效抑制CDT1的表达,抑制效率为88％.结论 成功构建基因组不稳定肝细胞CDT1基因过表达和RNAi模型,为进一步研究CDT1在辐射诱发基因组不稳定细胞中的功能提供了有效的研究工具.

关键词：CDT1基因、过表达、RNAi、慢病毒载体

所属期刊栏目：46

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：中国核工业集团公司青年科技创新团队项目

在线出版日期：2015-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：103-107,191