高AT含量DNA片段PCR扩增体系的优化

摘要：

选用4种不同长度(1.0～5.4 kb)、高AT含量(72％～80％)的真菌线粒体DNA片段,通过比较4种PCR添加剂(牛血清白蛋白(BSA)、二甲基亚砜(DMSO)、甲酰胺和镁离子)和4种KOD系列DNA聚合酶(KOD-Plus-、KOD-Plus-Neo、KOD FX和KOD FX Neo)对PCR扩增效果的影响,优化高AT含量DNA片段的PCR扩增体系.结果 表明:当PCR体系中单独使用1种添加剂时,只有镁离子能够促进扩增,其他3种添加剂都不能产生预期扩增条带.BSA和DMSO对镁离子的扩增促进作用无负面影响,而甲酰胺会抑制镁离子的扩增促进作用.当镁离子存在时,4种KOD聚合酶的PCR体系均可获得预期的扩增产物;当缺乏镁离子时,使用KOD-Plus-或KOD-Plus-Neo聚合酶的PCR体系未能得到扩增产物,表现出对镁离子的依赖性.镁离子对高AT含量DNA片段的扩增具有促进作用,最佳使用浓度为1.75 mmol/L.研究结果为其他真核生物中高AT含量DNA片段的扩增提供了方法依据.

关键词：添加剂、PCR扩增、高AT含量DNA片段、镁离子

所属期刊栏目：48

分类号：Q93-3(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金;山西省自然科学基金;山西省回国留学人员科研资助项目

在线出版日期：2020-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：71-77