纳豆芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶基因的克隆表达及其生物信息学分析

摘要：

克隆表达Bacillus subtilis natto HSF 1410谷氨酸脱氢酶(GDH),测定其酶活性,并阐述其体内功能.将gdhA基因克隆入pET28a质粒在E.coli BL21(DE3)中表达,用生物信息学方法探究其蛋白结构、结构域特点.经测定Bacillus subtilis natto GDH同时具有NADP+和NAD+依赖活性,酶活比活力分别为3.140 U/mg蛋白和0.251 4 U/mg蛋白.生物信息学分析结果表明gdhA基因包含一个长度为1 275 bp的开放阅读框,编码424个氨基酸,蛋白分子量为47.05 kDa,理论等电点为5.58,不合跨膜区域,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主.其三级结构表明,该蛋白在45-174位氨基酸残基形成二聚化结构域,191-424位氨基酸残基形成NAD(P)结合位域.B.subtilis natto HSF 1410与E.coli中gdhA的二聚化结构域、NAD(P)结合位域的氨基酸相似度分别为29.23％、29.27％,显著高于B.subtilis 168中gdhA的氨基酸相似度;与B.subtilis 168中gdhA蛋白空间结构相比,B.subtilis natto HSF 1410与E.coli中gdhA在空间结构上更为相似,在体内主要负责促α-酮戊二酸转化成谷氨酸.

关键词：纳豆芽孢杆菌、谷氨酸脱氢酶、cDNA、克隆、生物信息学分析

所属期刊栏目：45

分类号：TS201.3(食品工业)

资助基金：陕西省科学技术研究发展计划2015KTCQ02-07;陕西省科学院科技计划2011k-13

在线出版日期：2017-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：82-86