利用CRISPR/Cas9技术构建GLRX3基因敲除的HEK293细胞系

摘要：

为了构建GLRX3(Glutaredoxin 3)敲除的HEK293细胞系,根据该蛋白结构特性设计了靶向于GLRX3基因Exon5的4个sgRNA,并通过T7E1检测确认了所设计sgRNA的有效性.将携带Cas9及靶向hGLRX3-Exon5的sgRNA1的打靶载体转染HEK293,通过药物Puromycin和细胞克隆化筛选出稳定GLRX3基因敲除的HEK293细胞株,并通过测序确定GLRX3两个等位基因均发生移码突变.通过免疫印迹在蛋白表达水平确认了该基因的敲除.利用CRISPR/Cas9技术成功构建了GLRX3敲除的HEK293细胞株,其为探索GLRX3的功能和作用机制提供了有效的细胞模型.

关键词：GLRX3、CRISPR/Cas9系统、基因敲除、基因编辑

所属期刊栏目：45

分类号：R393

资助基金：国家自然科学基金81272543,31470058,81301957;陕西省自然科学基金2014JZ005,2014JM4113

在线出版日期：2017-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：71-77