磷酸钙法转染瘤细胞效率的优化
为了探索磷酸钙法转染瘤细胞的最佳转染条件,以磷酸钙法将ANXA2特异性重组干扰质粒pU6H1-GFP-siANXA2导入人肝癌细胞SMMC-7721并优化了以下转染参数:转染前细胞汇合率、质粒剂量、质粒复合物形成时间、孵育时间、血清、抗生素有无及细胞传代次数等.以荧光显微镜观察GFP表达、半定量RT-PCR和western blotting评估转染效率.结果显示,转染前细胞50%～60%汇合率、8μg质粒用量(直径30 mm培养皿)、20～30 min沉淀形成时间及6 h孵育时间转染效率较高;细胞传代次数及抗生素有无对转染效率影响不显著,但血清在实验条件下是必不可少的.转染48 h后,GFP表达进入高峰期、ANXA2 mRNA和蛋白水平下调(P＜0.05).
磷酸钙转染法、细胞转染、转染效率、肝癌细胞
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R730(肿瘤学)
陕西省自然科学基础研究计划项目SJ08-ZT09;陕西师范大学大学生创新性实验计划国家级重点项目101071822
2011-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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