猪圆环病毒2型感染树突状细胞外泌体中差异miRNA分析

摘要：

[目的]本研究旨在探究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染中,树突状细胞(Dendritic cell,DC)外泌体miRNA在调节免疫反应中的作用.[方法]以正常的单核细胞来源树突状细胞(MoDC)来源外泌体(DEX)为空白对照组,病毒感染的MoDC来源外泌体(VDEX)为试验组,使用间接免疫荧光评估感染模型鉴定外泌体后,通过高通量测序技术分析两者中的差异miRNA.[结果]间接免疫荧光结果显示,与PCV2共孵育的MoDC中有特异性绿色荧光,表明PCV2感染MoDC模型建立成功.纳米颗粒追踪技术结果显示,超速离心法提取的外泌体直径分别为130 nm和120 nm.Western blot结果显示,两组外泌体均存在特异性标记蛋白CD63和TSG101.高通量测序结果显示,与DEX组相比,VDEX组共504种miRNA发生显著变化(P<0.05),其中161种表达上调,343种表达下调.qP-CR结果表明,与DEX相比,VDEX中ssc-miR-10b、ssc-miR-199a-3p-R-1、ssc-miR-532-5p、ssc-miR-425-5p、ssc-miR-210、ssc-miR-144-R+1、ssc-let-7c、ssc-miR-107-R-2、ssc-miR-22-5p-R-1和ssc-miR-296-3p-R+1表达量显著下降(P<0.05),与测序结果一致.GO分析显示,差异靶基因参与的生物学功能主要有转录调控(DNA模板)、RNA聚合酶Ⅱ对转录的正/负调控、信号转导和氧化还原等过程.KEGG通路分析发现,差异靶基因主要参与T细胞受体信号通路、Th17细胞分化通路、癌症通路、细胞内吞作用和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路等.通过差异miRNA显著性P值、Fold-change和KEGG富集分析,最终确定出个10目标miRNA.[结论]VDEX中差异性表达的miRNA及其靶基因通过调控T细胞的增殖分化来调节免疫反应.

关键词：猪圆环病毒2型、外泌体、微小核糖核酸、高通量测序、树突状细胞

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分类号：S852.3;S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：山西省重点研发计划项目202102140601019

在线出版日期：2023-09-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：54-64