葡萄VvWDR1生物信息学分析及其互作蛋白分析

摘要：

[目的]探究葡萄WDR1蛋白的作用机理,丰富原花青素和花青苷物质合成调控机理.[方法]采用PCR技术克隆葡萄WDR1基因CDS区,运用生物信息学分析对其编码蛋白理化性质、亲疏水性、信号肽及跨膜结构域、二级结构、三级结构、保守结构域等进行预测;将VvWDR1的CDS全长克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,转化酵母感受态细胞并进行毒性及自激活检测分析;通过酵母双杂系统对葡萄WDR1与MYBPA2、MYC2蛋白互作机制进行研究.[结果]WDR1基因cDNA全长1011 bp,编码366个氨基酸,分子量37.8 kD,等电点5.07,分子式为C1671H2588N458O518S11;无信号肽且不具有跨膜结构域,其编码蛋白的二级结构中无规则卷曲39.29％,β?折叠26.79％,α?螺旋22.02％,β?转角11.90％;该蛋白含有5个WD40基序.同时对葡萄WDR1蛋白进行系统进化分析,发现与PhAN11、AtTTG1的同源性较高;成功构建表达载体pGBKT7?WDR1、pGBKT7?MYC2、pGADT7?MYC2,并鉴定出VvWDR1在酵母细胞中无自激活活性且无毒性;酵母双杂交试验结果显示,共转化pGBKT7?WDR1/pGADT7?MYBPA2与pGBKT7?WDR1/pGADT7?MYC2的酵母菌可以在SD/?Trp?Leu?His?Ade的四缺培养基上正常生长.[结论]克隆得到葡萄WDR1基因,对其进行生物信息学分析,且通过酵母双杂交证明VvWDR1与VvMYBPA2、Vv?MYC2编码的蛋白之间存在相互作用.

关键词：葡萄;VvWDR1;VvMYBPA2;VvMYC2;酵母双杂交

所属期刊栏目：42

分类号：S663.1(果树园艺)

资助基金：山西省应用基础研究计划;国家自然科学基金;山西省重点研发计划项目

在线出版日期：2022-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：43-50